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结核杆菌(TB)感染的发病率仍然不低,在韩国年的发病率大约是10万分之70。结核杆菌的感染诊断手段国内尽管已经从结核菌皮试和TB抗体检测发展到IGRA检测(干扰素γ释放试验),IGRA检测包括TB-SPOT和QuantiFERON-TBGold,后者特异性和敏感性更强。然而IGRA检测还是基于酶联免疫吸附法(ELISA),还是存在一定的敏感性限制。为此,Won等人在年在Cytometry杂志上发表了一篇文章,利用MTB衍生抗原(ESAT-6和CFP-10)刺激T细胞,然后用胞内因子流式细胞术(ICCFC)检测T细胞内的IFN-γ和TNF-α,将该方法与QuantiFERON-TBGold进行了对比。
标本:
外周血,以空白对照、MTB抗原、PHA分别在37℃下刺激16小时。
(1)做QuantiFERON-TBGold检测的标本,每孔取μL血浆以QuantiFERON-TBGold检测,以0.35IU/ml为阳性标准。
(2)做ICCFC的,加入细胞因子分泌抑制剂,孵育2小时,然后取0.5ml全血转移到15ml塑料管中,加入BFA(终浓度10μg/ml),再经14小时孵育后,加入5ml含固定成分的裂解液,裂解红细胞并且固定细胞,此时可以保存在-80℃下。收集到一批标本时,可以一起在37℃温水中复苏,以7mlPBS洗涤一次,加入2mlPBS在37℃下孵育10分钟,再次洗涤,接着加入90μL破膜剂,作用10分钟,最后加入IFN-γ、TNF-α、CD4、CD3抗体孵育。最后上机检测。
分析流程如下图:
下表显示了各类细胞亚群的阳性阈值(每10万个细胞中的阳性细胞数量)及其敏感度:
最后,22例QuantiFERON-TBGold阳性的病例,ICCFC也全部阳性,而14例QuantiFERON-TBGold阴性的病例中,64%ICCFC可以检测出阳性(9/14),提示ICCFC的敏感性远高于QuantiFERON-TBGold。
至于15例非TB患者的假阳性率,ICCFC只有1例假阳性,并且只是在ESAT-6刺激的标本中(表达率13.3%,阈值12.6%)。
不过在第90届日本结核病学年会针对QuantiFERON-TBGold和TB-SPOT的对比研究中,QuantiFERON-TBGold却表现出色,流式中文网认为可能跟选择的病例有关。相信流式的敏感性应该是更强。
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