结核感染T细胞检测

医院实验诊断科开展特色诊断项目系列介绍之（二）——结核感染T细胞检测

小贴士

1.结核感染T细胞检测，是以ELISPOT技术检测结核感染的新方法，是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法之一。

2.医院实验诊断科锐意进取已开展T-SPOT.TB检测两年，如今标本量日益增加，临床应用前景相当可观。

3.T-SPOT.TB检测可辅助肺外结核、儿童结核、活动性结核与潜伏性结核等诊断。

4.T-SPOT.TB检测无需空腹，可在工作日“周一至周五”上午11：30之前采样；需用BD肝素锂抗凝绿头长管（2管），外周血量≥5ml；2个工作日（周末及节假日除外）于门诊一楼取报告处打印报告。

5..T-SPOT.TB检测科室为临床实验诊断-微生物室，咨询方式Tel：-。

项目介绍理论基础T-SPOT.TB

T-SPOT.TB是以ELISPOT技术检测结核感染的新方法,ELISPOT技术是近20年发展起来的检测抗原特异性T细胞的技术,是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法之一。

结核分枝杆菌为胞内寄生菌，体内结核感染后会长期存在抗原特异性的记忆性T细胞,当再次遇到抗原刺激时,能迅速活化增殖,释放γ干扰素。基于此原理，英国学者Lalvani建立了以RD1编码的结核特异性抗原6kD早期分泌靶向抗原(earlysecretingantigentarget-6,ESAT-6)和10kD培养滤过蛋白(culturefiltrateprotein-10,CFP-10)为刺激源,检测外周血中结核特异性释放γ干扰素的T淋巴细胞。其可以检测出1/-1/外周血单个核细胞(PBMCs)中经某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞，再经过酶联显色后,通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出抗原特异性细胞的频率。从而辅助诊断是否存在结核分枝杆菌感染的新方法。T-SPOT.TB年在欧洲、年在加拿大被批准使用,年被美国FDA批准应用于临床诊断。

T-SPOT.TB的实验结果清晰,易于判断。如下图，实验设有空白对照、阳性对照以及以ESAT-6和CFP-10肽段库作为刺激原的两个实验孔。空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为实验有效。T-SPOT.TB的实验结果用每PBMCs中斑点形成细胞(spotformingcells,SFCs)的数目来描述,即SFCs/PBMCs。

★对比常规项目涂片抗酸染色快速、低成本

具特异性(种)，但敏感性不强，没有鉴定出分枝杆菌的属或种；

痰涂片敏感性低：10,个菌/ml，检查个视野可找到1个菌；

痰涂片不能区分MTB和NTM；

MTB培养速度缓慢：增代时间为18－20小时，从1CFU到肉眼可见的菌落需3－5周

阳性结果：分枝杆菌出现传染

阴性结果：不排除分枝杆菌的出现

分子诊断技术

①对于肺外结核诊断分子生物学技术的有较大的局限性

②大部分技术需要在菌阳标本或用菌株作为样本，对菌阴标本无法检测

需要专门的仪器，目前普及率不高

尚无针对结核菌潜伏感染的诊断技术

血清抗体检测

由于MTB的抗原性较弱，且与其它分支杆菌具有较强的交叉免疫，其血清抗体检测的灵敏度和特异性均较低，不适合临床应用。

结核菌素实验原理为通过皮试检测机体对MTB的T细胞免疫反应，所用抗原主要为结核菌提取物（PPD）；

①特异性低：与卡介苗和环境中的分支杆菌会产生交叉反应②敏感性低：在活动性结核中只有75%-90%；

③影响因素较多：年龄、卡介苗接种、免疫力、环境分支杆菌、药物、操作人员等。

T-SPOT.TB特点

『优点』

①特异性好，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗无交叉反应，其特异性为93%-%。

②灵敏度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率；其敏感性为90%-95%。

③快速，24-48小时可报告结果，是目前诊断结核病最有价值指标之一。

『弊端』

①对标本要求高，不能冷冻或冷藏，血液样本需要短时间内进行送检和检测。

②结果需要结合临床和其它检测进行判断，阴性结果不能排除暴露或感染结核杆菌的可能性。

③不能确定病变部位。

由此可见

结核感染的常规检测诊断方法存在着阳性检出率偏低，假阳性率与假阴性率较高，会影响临床诊治的需要，而结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）具有高灵敏度、高特异性而且快速的检测的特点。在鉴别活动性结核和潜伏性结核感染、预测结核发病风险方面也具有一定意义,而且被越来越多的国家认可并应用于临床诊断。

临床意义

本项检测辅助临床诊断结核感染，可用于结核病的快速诊断，应用于控制活动性结核的发生与再发生、潜伏性结核感染的预防、儿童结核病的辅助诊断，可为临床诊断肺结核和肺外结核提供重要依据。

结果判断及评估提示

结果判断.根据抗原A或/和抗原B孔的反应

检测结果为“阳性”，参照以下标准：

①空白对照孔斑点数为0-5个时，(抗原A或抗原B孔的斑点数)-(空白对照孔斑点数)≥6；

②空白对照孔斑点数为6-10个时，(抗原A或抗原B孔的斑点数)≥2×(空白对照孔斑点数)；

如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“阴性”。

结果评估.

?阴性结果：提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。

（附）假阴性结果?①感染窗口期；②少数免疫系统功能不全/疾病。

?阳性结果：提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否是活动性结核病，需结合既往病史，临床症状等其它检测指标综合判断。

（附）假阳性结果时?可能是M.kansasii（堪萨斯）、M.szulgai（苏氏）、M.marinum（海）、M.gordonae（戈登）4种环境分枝杆菌感染。

再接再厉

Improve

基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点,T-SPOT.TB技术的检测物已不仅局限于静脉血,支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。此前，已有临床医生向我们咨询过是否可以检测胸腹水、脑脊液等标本，相信随着该技术的不断发展，医院检验科仍不断开展其他标本类型的T-SPOT.TB检测项目，以满足临床的诊疗需求，为临床提供更强有力的辅助诊断。

爱心贴士

今年的3月24日已经是第20个“世界防治结核病日”，宣传主题为“你我共同参与，依法防控结核——发现、治疗并治愈每一位患者。“那么我们如何更好地预防结核感染呢？

养成良好的个人卫生习惯，不随地吐痰，不面对他人咳嗽、打喷嚏

房间经常开窗,保持通风；屋内湿润，清洁卫生、避免扬尘；勤洗被褥、勤晒太阳；

经常参加户外活动，锻炼身体增强体质；加强营养均衡饮食。

定期参加学校组织的体检，及早发现早期结核病患者。

如有咳嗽、胸闷、气短、医院进行确诊。

病人要进行正规治疗。一定要到国家指定的正规的结核病防治机构进行诊断和接受正规的治疗和管理，坚持早期、适量、联合、规律、全程五原则，彻底治愈结核病。

感谢了解sh特色项目，希望对大家有所帮助。好东西值得推广，快快







































白癜风哪里治最好
北京的白癜风医院有哪些


转载请注明:http://www.jvjfw.com//mjccjc/6154.html